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1　酵母耐盐分子机制的研究现状1

1.1　盐胁迫信号的传导途径2

1.2　盐胁迫下酵母的平衡调节机制5

1.3　酵母盐胁迫应答基因的转录应答模式7

1.4　盐胁迫下酵母基因组的转录应答功能组9

1.5　酵母耐盐机制的主要研究方法10

1.6　酵母耐盐基因的研究在植物耐盐基因研究中的作用11

1.7　展望12

2　酵母耐盐分子生物学的常用研究方法与实践14

2.1　酵母菌的培养14

2.2　酵母菌菌种的保存17

2.3 酵母基因组DNA的提取18

2.4　酵母RNA的提取22

2.5 酵母总RNA中DNA的去除33

2.6 酵母总RNA的纯化35

2.7 mRNA的分离35

2.8 酵母质粒DNA的提取37

2.9　酵母菌转化方法37

2.10　酵母菌落PCR的方法39

2.11　酵母菌耐盐性检测——Drop test方法39

2.12　酵母菌耐盐性检测——生长曲线测定40

2.13　酵母菌渗透调节剂甘油的含量测定40

2.14　酵母菌渗透调节剂海藻糖的含量测定41

3 盐胁迫下酿酒酵母和鲁氏酵母渗透平衡调节方式的研究42

3.1 不同盐胁迫条件下酵母细胞内海藻糖含量的变化43

3.2 盐胁迫下酿酒酵母和鲁氏酵母中的海藻糖对渗透平衡的调节方式45

3.3 不同盐胁迫条件下酵母菌细胞内和细胞外甘油含量的变化45

3.4　盐胁迫下酿酒酵母和鲁氏酵母中的甘油对渗透平衡的调节方式50

4　渗透平衡调节基因ScGPD1的克隆及其在酿酒酵母中的超量表达对酵母耐盐性的影响52

4.1 渗透平衡调节基因ScGPD1的克隆及核苷酸序列分析54

4.2 渗透平衡调节基因ScGPD1的氨基酸序列及蛋白质结构分析56

4.3　ScGPD1基因在离子调节缺陷型酿酒酵母菌株中的表达对酵母耐盐性的影响58

4.4　ScGPD1基因在野生型酿酒酵母中的表达对酵母耐盐性的影响60

5 离子平衡调节基因AtNHX1的克隆及其在酿酒酵母中的表达对酵母耐盐性的影响64

5.1 离子平衡调节基因AtNHX1的克隆及其核苷酸序列分析65

5.2　离子平衡调节基因AtNHX1的氨基酸序列分析67

5.3　AtNHX1基因的表达调控70

5.4　AtNHX1基因在渗透调节缺陷型酿酒酵母菌株中的表达对酵母耐盐性的影响72

5.5　AtNHX1基因在野生型酿酒酵母菌株中的表达对酵母耐盐性的影响74

6　渗透平衡调节基因ScGPD1与离子平衡调节基因AtNHX1在酿酒酵母中的共表达对酿酒酵母耐盐性的影响78

6.1 ScGPD1与AtNHX1的双基因酵母表达载体的构建79

6.2　ScGPD1与AtNHX1的双基因酵母表达载体转化酵母菌80

6.3 酵母中ScGPD1与AtNHX1基因在转录水平上表达的检测81

6.4　ScGPD1基因与AtNHX1基因在野生型酿酒酵母中的单独表达与共表达对酵母耐盐性的影响82

7　酿酒酵母离子平衡调节基因ScHAL1的克隆及其对烟草耐盐性的影响91

7.1 ScHAL1基因的克隆与核苷酸序列分析92

7.2　HAL1基因的表达调控94

7.3　ScHAL1基因植物表达载体的构建96

7.4　ScHAL1基因转化烟草及转基因烟草的分子生物学检测98

7.5　ScHAL1基因在烟草中的表达对烟草耐盐性的影响102

7.6　ScHAL1基因在耐盐植物基因工程中的作用105

8　鲁氏酵母盐诱导抑制性消减杂交文库的构建与盐胁迫应答基因EST表达谱的研究108

8.1 鲁氏酵母盐诱导抑制性消减杂交文库的构建111

8.2　鲁氏酵母盐胁迫应答ESTs表达谱的分析114

参考文献118